Heteroplasmia de la mutación del ADN mitocondrial m.3243A>G en la diabetes y sordera de herencia materna
Luis Rodrigo Cataldo,
Pablo Olmos, Susan Valerie Smalley, Alberto Díez, Alejandra
Parada, Roger Gejman, Ricardo Fadic, José Luis Santos
La diabetes de
herencia materna y sordera ( MIDD ) es causada por mutaciones en el ADN
mitocondrial (ADNmt ), principalmente m.3243A > G. Su severidad, el comienzo
y el fenotipo clínico de los pacientes MIDD se determinan en parte por la
proporción de copias mutantes de ADN mitocondrial en cada célula y tejido (
heteroplasmia ) . La identificación de MIDD permite un tratamiento
con insulina evitando fármacos que puedan interferir con la cadena
mitocondrial. Se estimó el grado de heteroplasmia de la mutación m.3243A > G
de la sangre , la saliva, la raíz del pelo y una biopsia muscular mediante PCR
cuantitativa (qPCR ) en un paciente adulto femenino. Para ello, se produjo PCR
se insertaron en un vector creatina plasmática con 3243A o G. Mutant y vectores
de tipo salvaje se mezclaron en diferentes proporciones para crear una curva de
calibración se utiliza para interpolar heteroplasmia porcentajes con ciclos de
umbral qPCR . Las proporciones de m.3243A > G heteroplasmia eran 62 %
(músculo ) , 14 % ( saliva ) , 6 % ( leucocitos de la sangre ) y 3 % en la raíz
del pelo . El análisis cuantitativo de heteroplasmia mostró marcadas
variaciones en diferentes tejidos (más alto en el músculo y el más bajo en la
sangre ) . Dada la relativamente alta heteroplasmia encontrado en la saliva ,
este tipo de muestra biológica puede representar una manera no invasiva
adecuada para evaluar la presencia de mutaciones m.3243A > T en estudios
epidemiológicos .
Palabras clave: Sordera ; ADN ,
mitocondrial ; Las técnicas genéticas .
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Objetivo:
- Evaluar
el grado de Heteroplasmia de la mutación m.3243A>G en digerentes
tejidos obtenidos de una pacientes afectada con MIDD (sangre, raiz de
pelo, musculo y saliva).
- Evaluar
su utilidad.
Muestras
Biológicas:
- Saliva
no estimulada
- Raíces de
Pelo
- Leucocitos
de Sangre
- Biopsia
de Tejido Muscular del Antebrazo
Extracción de
AN: ADN
mitocondrial y Genomico
- Metodo
Oragene Kits
- Resina
Chelex-100
- y 4.
Wizard Genomic ADN Purification Kit; Promega & Cuantificación
de ADN: Fluorimétricamente
Gen
Amplificado:
gen MT-TL1
(429 pb, 312 pb y 117 pb)
Tipo
de PCR:
PCR-RFLP
qPCR
Visualización:
Electrofluorescencia
Pasos
de la PCR:
- 95ºC
por 10 min
- 92ºC
por 25 seg -> 40 ciclos
- 60ºC
por 80 seg
Analisis
Estadistico:
Eficiencia: 1,8
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